脱氧核糖核酸酶I(DNaseI)也来源于牛胰,是内切核酸酶,没宽竖可优先从嘧啶核苷酸的位置水解双链或单链DNA。在Mgsuperscript2+superscript存在下,独立作用于每条DNA链,且切割位点随机。在Mnsuperscript2+superscript存在下。
它可在两条链的大致同一位置切割dsDNA,产生平端或12个核苷酸突出的DNA片段。DNaseI用途广泛,如切口平移标记时在dsDNA上随机产生切口;在闭环DNA上引入单切口,以将分子截巧扒短(在亚硫酸氧盐介导的诱变前);建立枯大随机缺失的嵌套缺失体,用于功能分析或测序;在DNA酶足迹法(DNA:footprinting)中分析蛋白—DNA复合物;除去RNA样品中的DNA。