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什么是基因敲除?

说到基因敲除,先要了解CRISPR/Cas基因编辑系统

CRISPR/Cas(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/Cas)系统是目前被广泛运用的基因编辑系统,其原理是由CRISPR转录产生的gRNA介导Cas核酸酶靶向目标序列谈早,对序列进行切割。

什么是基因敲除?

CRISPR/Cas9基因编辑示意图

(图源:Wellcome Trust Sanger Institute,Sanger)

然后我们再来看看您问的CRISPR/Cas基因敲除

CRISPR/Cas9系统中sgRNA(smallguideRNA)识别并结合目标基因的靶向序列,引导Cas9对结合位点进行剪切,产生DNA双链断裂(double-strandbreak,DSB),机体自身通过非同源重组(non-homologousendjoining,NHEJ)的方式修复DSB,参与修复的蛋白经常会在DNA末端插入或删除几个碱基,修复后的基因由于产生突变而导致功能丧失,明并从而实现机体内的基因敲除。

最后再来看看如何应用

应用:基因敲除细胞系建立、基因敲除建立动物疾病模型。

技术优势:相较于在mRNA水平“敲低”目的基因的RNAi而言,CRISPR/Cas9系统造成基因序列的缺失,从而能完全沉默(即敲除)目激侍迹的基因。

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